離子色譜法測定尿中的Ca2+、Mg2+、C2O42-離子

更新時間:2015-01-29  點擊次數:4923


摘要:本文利用離子色譜法成功的測定了尿液中的草酸根、鈣、鎂離子。測草酸時先在尿液中加入氯化

鈣而生成草酸鈣沉淀,再用鹽酸溶解該沉淀的尿樣預處理方法;測鈣鎂時利用消解預處理方法, 即在

酸性尿樣中加入氧化劑過硫酸鉀, 然后在微沸狀態下氧化尿中的有機物, 從而除掉對柱有污染的物質。

關鍵詞:離子色譜法  尿  草酸根  鈣離子  鎂離子  測定


尿路結石的成分較為復雜,多為草酸鈣、磷酸鈣、磷酸鎂銨等,如這些晶體在尿液中飽和度過高,則易

起析出、沉淀、結聚,以致尿石形成。尿路結石中zui常見的成分為草酸鈣,另外在堿性尿液中(pH值大于

7),磷酸鈣或磷酸鎂結石極易形成??梢娔蚵方Y石的形成與尿中的草酸、鈣離子、鎂離子含量有關。

目前,測定尿液中草酸、鈣離子、鎂離子主要用滴定法[1-4], 該方法操作復雜,受干擾因素較多,容

易導致測定結果不準確。而離子色譜法操作簡單、快速、方便[5],測定結果準確可靠,筆者用離子色譜

法測定了尿液中草酸、鈣離子、鎂離子,這對診斷及治療結石病有很重要的意義。


實驗部分

1.1  主要儀器與試劑

離子色譜儀:CIC-100型,青島盛瀚色譜技術有限公司;

陰分離柱:YSA8型,北京核工業研究院;

陽分離柱:KADY50P19型,德國艾米諾西斯公司;

Mg2+標準儲備液:1 mg/ml-1,國家標準物質研究中心;Ca2+標準儲備液:1 mg/ml-1,準確稱取0.2775gCaCl2,

用水溶解并定容到100mL;C2O42-標準儲備液:1 mg.ml-1,準確稱取0.2775gH2C2O4,用水溶解并定容到100mL;

C2O42-淋洗儲備液:Na2CO3:0.24mol.L-1,準確稱取25.4g Na2CO3,用水溶解并定容到1000mL;

NaHCO3:0.30mol.L-1,準確稱取25.5g NaHCO3,用水溶解并定容到1000mL;

Mg2+、 Ca2+淋洗儲備液:0.25mol乙二胺/0.15mol硝酸,在燒杯中加入100 mL去離子水,再依次加入

99%乙二胺8.5 mL、69%硝酸3.1 mL和99%冰醋酸20 mL,然后滴加冰醋酸調節pH值為4.5,定容到500mL;

樣品溶液均用孔徑為0.22um濾膜濾過;

實驗所用藥品均為分析純;

實驗用水為去離子水。

1.2  色譜條件

(1)測C2O42-

淋洗液為5.7 Na2CO3-4.8 NaHCO3mmol.L-1的混合液;淋洗液流速:1.4ml.min-1;進樣量100uL;

抑制電流50mA。

(2)測Mg2+、 Ca2+

淋洗液為1.25 mmol.L-1乙二胺/0.75 mmol.L-1硝酸;淋洗液流速:1.4ml.min-1;進樣量100uL;

單柱法。

1.3  樣品處理

(1)測C2O42-

取尿液80mL,微熱,加入0.3gCaCl2,緩慢攪拌約3分鐘,此時生成草酸鈣沉淀,保持恒溫靜置沉淀2小時

左右,過濾,沉淀用CaCl2稀溶液沖洗2次,然后用1mol/L的HCl溶液溶解沉淀, 沉淀*溶解后再用

子水沖洗濾紙兩次,收集溶解沉淀及沖洗濾紙的溶液,調其pH為7,然后用C18柱過濾,定容到100mL,待測。

(2)測Mg2+、 Ca2+

取30mL尿液,加入3g過硫酸鉀,再加入幾滴硫酸(使尿液顯酸性即可),加熱使尿液微沸,蒸至剩有少

量溶液但還沒有蒸干時停止加熱,冷卻后定容到50 mL,然后再稀釋5倍,用C18柱過濾,待測。


結果與討論

2.1  尿樣的預處理

尿液中的成份復雜,其中含有蛋白質等有機物以及陰陽離子等。蛋白質等有機物會污染分離柱中的離子

交換樹脂,導致柱效降低或者直接損壞分離柱,因此測定尿液時必須對其進行預處理以除去可污染分離

柱的成份。實驗表明,CaCl2 可與尿液中的C2O42-形成沉淀,過濾分離后用鹽酸溶解,C2O42-的回收率符

合要求。而像尿液中加入過硫酸鉀,在酸性條件下可將尿液中的有機物氧化去除,有效地消除測定Mg2+、 

Ca2+時尿液中有機成分的干擾。


2.2  標準工作曲線

配制一系列C2O42- 、Mg2+、 Ca2+離子的標準溶液,它們的濃度分別為0.6、3、15、30、60;2、5、10、

20、30;5、10、20、30、40mg/L。分別在上述各離子色譜工作條件下,測定C2O42-、Mg2+、 Ca2+

離子的標準溶液,得到的C2O42- 、Mg2+、 Ca2+標準曲線分別為:

Y = 15317.27 + 3.128x104X,r = 0.9998;Y = 39792.83 + 1.673x104 X,r = 0.9955;

Y = 1485. 90 + 1.556x105 X,r=0.9996??梢?,在所測定范圍內,C2O42-、Mg2+、 Ca2+離子的濃度與

峰高成很好的線性關系。

2.3 精密度實驗

分別取15、10、20 mg/L的C2O42-、Mg2+、 Ca2+作為標樣,平行測定5次結果列于表2,結果表明C2O42-、 

Mg2+、 Ca2+的相對標準偏差RSD分別小于2.4%、3.1%、2.5%,可見本分析系統有很好的重現性。

2.4  回收率實驗

為了考察本方法測定結果的可靠性,用實際樣品尿液做回收率實驗。其測定結果如表3所示??梢姳痉椒y定結果準確可靠。


2.5尿液樣品的測定

尿樣中C2O42-、Mg2+、 Ca2+的測定譜圖如圖1、圖2所示。測定結果如表5所示。




結論

利用氯化鈣生成草酸鈣沉淀。再用鹽酸溶解該沉淀以測定C2O42-,用過硫酸鉀氧化除去尿液中的有機成

分,以消除測定Mg2+、 Ca2+時的干擾。離子色譜法測定C2O42-、 Mg2+、 Ca2+操作簡便,結果準確。

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余 濤,張益平.中西醫結合治療上尿路結石,醫學理論與實踐,2000,(13),47.

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